宠物犬血清新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗体的检测报告
----针对多地犬的血清检测结果看新冠病毒是否感染犬
林德贵1，邓均华2，田克恭3，蒋书东4，张润5，霍家奇6
（1.中国农业大学动物医学院，中国畜牧兽医学会小动物医学分会；2.洛阳普泰生物技术有限公司；3.国家兽用药品工程技术研究中心；4.合肥天红动物医院；5.深圳维特动物医院；6.武汉芭比堂动物医院；）
新型冠状病毒肺炎疫情下，人与动物的安全是我们当今社会的公共卫生大事之一。为了及时诊断家养宠物犬是否面临新冠病毒的感染，我们启动了宠物犬血清新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗体的检测。本项目在国家权威的实验室进行，采样、运输、保管、样本处置、实验室资质、检测方法与操作，均符合国家的相关要求。
1 技术原理
采用双抗原夹心ELISA反应原理，酶标板上包被SARS-CoV-2重组蛋白S1抗原，待检样品中的SARS-CoV-2特异性抗体与包被的重组蛋白S1抗原结合，加入含HRP标记SARS-CoV-2重组蛋白S1抗原的酶标试剂进行温育。当样品中存在SARS-CoV-2抗体时，不管是IgM还是IgG抗体，都将形成"包被抗原-抗体-酶标抗原"复合物，复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物，终止反应后变为黄色。若样品中无SARS-CoV-2抗体，则不显色。
2材料
2.1 临床血清：深圳维特宠物医院犬血清8份，安徽某宠物医院犬血清9份，武汉某宠物医院犬血清6份，海口某宠物医院4份。
2.2 阳性血清：SARS-CoV-2重组蛋白S1抗原免疫犬血清，编号001，国家兽用药品工程技术研究中心提供。
2.3试剂盒：新型冠状病毒(SARS-CoV-2)双抗原夹心ELISA抗体检测试剂盒，批号：E22A2003S，洛阳普泰生物技术有限公司研发生产。
3 试验方法：
3.1按照试剂盒说明书对不同来源的犬血清分别进行检测。
3.2试剂盒结果计算方法
临界值（CUTOFF）计算：临界值=0.16+阴性对照孔OD值均值（阴性对照孔OD值均值低于0.03者以0.03计算）。
3.3试剂盒结果判定
样品OD值≥临界值(CUTOFF)者为SARS-CoV-2抗体阳性；样品OD值<临界值(CUTOFF)者为SARS-CoV-2抗体阴性。
4试验结果
试剂盒检测SARS-CoV-2重组蛋白S1抗原免疫犬血清为阳性，27份临床犬血清均为阴性，详见附表1。结果表明，不论是在新冠肺炎疫情最为严重的武汉，还是安徽、深圳、海口等疫情轻微的省份，宠物犬均未发生新冠病毒感染。
抗体检测是证明犬是否被新冠病毒感染的科学证据，抗体阴性科学地证明这些犬并未被新冠病毒感染；更加深入的第二阶段扩大研究正在进行中。希望本研究结果对于我们正确认识当前疫情下的动物健康起到有益的帮助，尊重生命、相信科学。
作者：2020年3月5日星期四于北京
